Nan PCR (polymerase chèn reyaksyon) eksperyans, anbalaj ka sanble senp, men li dirèkteman enpak estabilite reyaktif, fasilite nan itilize, ak rezilta serye. Si estoke ak transpòte laboratwa - preparasyon reyaktif oswa premik komèsyal, metrize apwopriye teknik anbalaj PCR ka evite erè komen ak amelyore efikasite eksperimantal. Anba a, nou pataje konsèy pratik sou seleksyon materyèl, estrateji anbalaj, ak detay depo.
I. anbalaj seleksyon materyèl: priyorite konpatibilite ak protectiveness
Reyaksyon PCR yo sansib a tanperati, limyè, ak kontaminan, se konsa materyèl anbalaj yo dwe satisfè twa kondisyon kle: byen, limyè - prèv, ak inertness chimik.
Pou tib santrifijez ak plak PCR, polipropilèn (PP) pi pito, akòz transparans segondè li yo ak dnase/rnase - pwopriyete gratis . 0.2 ml mens {{2} Pou 96 - byen plak PCR, nou rekòmande pou chwazi yon konsepsyon skirted (pou fasilite nan manipilasyon Robotics) oswa yon konsepsyon ki pa skirted (pou konsèvasyon espas).
Metòd pou poze sele: tib santrifij konvansyonèl yo itilize kapsil plat oswa leve (pou anpeche evaporasyon ak siye soti). Sepandan, pou lontan - depo tèm, chalè - sele fim (tankou parafilm) oswa fim rèspirant (tankou aeraseal) rekòmande pou balanse presyon entèn ak ekstèn. Plak PCR yo rekòmande yo sèvi ak adezif aliminyòm seleur papye (segondè - tanperati rezistan) oswa pwòp tèt ou - adezif fim (pou yon sèl - itilize).
Pwoteksyon limyè: reyaktif ki gen limyè - Engredyan sansib (tankou sèten koloran oswa prime) yo ta dwe vlope nan papye aliminyòm, oswa plak PCR nwa (ki disponib nan kèk manifaktirè) yo ta dwe itilize.
II. Teknik alikòt: minimize pèt soti nan repete friz - Cycles Thaw
Reyaktif alikot se yon etap debaz nan anbalaj PCR ak dirèkteman enpak repwodiksyon eksperimantal.
Mèt melanj alikòt: melanje komèsyal mèt (tankou Taq anzim ak DNTP melanj) yo rekòmande yo dwe aliquoted ki baze sou volim nan reyaksyon plis yon 5% - 10% Marge (egzanp, pou yon reyaksyon 20 μl, aliquot 22 μl pou chak tib). Evite sèvi ak dirèkteman nan anbalaj esansyèl, kòm repete friz - sik efondreman ka mennen nan diminye aktivite anzim (Taq anzim ka pèdi apeprè 5% aktivite pou sik friz-efondreman).
Primè ak modèl: prime (sitou prime koutim) yo rekòmande yo dwe alikere soti nan 100 μm solisyon stock ak ki estoke nan - 20 degre. Dilye nan yon konsantrasyon k ap travay (anjeneral 0.1-1 μM) anvan ou itilize. Modèl tankou ADN jenomik yo ta dwe alikere nan yon sèl - Sèvi ak kantite pou fè pou evite kontaminasyon kwa-.
Konsèy prevansyon kontaminasyon: Asire tib santrifij yo sèk anvan alikòt (etanòl rezidyèl ka anpeche PCR), pre - Konsèy pipèt fre yo anpeche reyaktif frèt soti nan rete soude nan miray la, epi mete gan nan tout pwosesis la pou fè pou evite kontaminasyon ADN po.
Iii. Etikèt ak dosye kenbe: Evite "bwat nwa" pèlen an
Etikèt klè se kritik pou anbalaj PCR; Etikèt ki pa kòrèk ka ruin tout eksperyans lan.
Enfòmasyon sou etikèt obligatwa: non reyaktif (egzanp, "2 × Taq Mastermix"), konsantrasyon/kontni (egzanp, "10 mM dntps"), nimewo pakèt (pou trasabilite), kondisyon depo (egzanp, "-20 degre pwoteje soti nan limyè"), dat aliquot, ak dat ekspirasyon (egzanp, "itilize nan 6 mwa").
Etikèt espesyal: Si reyaktif la gen gliserin (antijèl), koloran (egzanp, SYBR vèt), oswa aditif (egzanp, BSA), yo dwe bay plis enfòmasyon (egzanp, "gen 50% glycerol, pa magazen nan tanperati ki wo").
Dosye senkronizasyon: Li rekòmande pou itilize yon calcul oswa lojisyèl jesyon laboratwa (egzanp, labguru) nan dosye paramèt yo an detay nan sa ki nan chak tib (egzanp, sekans Jadendanfan, valè TM) ak asosye yo ak nimewo etikèt la fizik.
Iv. Depo ak transpò: Tanperati balanse ak pwoteksyon fizik
Estabilite nan reyaktif PCR se trè depann sou kondisyon depo, ak pwoteksyon adisyonèl ki nesesè pandan transpò.
Depo jeneral:
Anzim (Taq, ranvèse transcriptase): long - depo tèm nan - 20 degre (evite repete friz -efondreman sik; alikòt ak magazen nan -80 degre pou itilize nan lavni);
Prime/sond: magazen nan -20 degre pou plis pase 1 ane (si ki gen yon gwoup modifye tankou biyotin, pwoteje soti nan limyè);
Ki pa - tanpon anzim (egzanp, PBS): kout - depo tèm nan 4 degre (jiska 1 mwa).
Kondisyon pou transpò:
Pou transpò chèn frèt, sèvi ak glas sèk (- 78 degre) pou anzim (konsève anba a -20 degre), ak glas ble (alantou 0 degre) pou tanpon pou kout tèm transpò.
Evite twòp Vibration (plak PCR yo ta dwe garanti nan bwat kim yo anpeche melanje nan reyaktif ant pwi).
Pandan tanperati ete segondè yo, ajoute yon kouch izolasyon nan anbalaj la (egzanp, aliminyòm papye izolasyon papye + pake jèl jele).
V. Pwoblèm komen ak solisyon yo
Pwoblèm 1: presipitasyon reyaktif (egzanp, DNTPs oswa MGCL₂ presipitasyon nan tanperati ki ba) → Solisyon: yon ti tan santrifijez (1000 rpm, 1 minit) anvan alikòt. Fonn nan yon enkibatè 37 degre anvan ou itilize ak toubiyon melanje byen.
Pwoblèm 2: Plak Plak fasil dekale sou → Solisyon: Chwazi chalè - Sealer rezistan ak yon fè bak adezif, oswa itilize yon seleur chalè (apwopriye pou segondè - eksperyans debi).
Pwoblèm 3: Labels twoub → Solisyon: Sèvi ak yon makè ki enpèmeyab (tankou yon sharpie) oswa lazè - etikèt enprime yo anpeche ekriti pou yo te efase pa alkòl.
Konklizyon
Anbalaj PCR se pi plis pase jis "anbalaj" réactifs; Li se premye liy defans pou fyab eksperimantal. Pa chwazi materyèl ki apwopriye yo, estandadize pwosesis la alikòt, kenbe bon jan etikèt, ak kenbe strik kontwòl tanperati pandan transpò, ou ka siyifikativman diminye erè moun, asire plis ki estab reyaksyon anplifikasyon ki vin apre ak plis rezilta serye. Sonje byen: detay detèmine siksè. Bon pratik anbalaj PCR ka sove siyifikatif depanaj tan nan tout eksperyans ou tout!